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临床医学血液细胞检验的质量控制
摘要：血液细胞检验分析在临床上有着举足轻重的地位，尤其对于血液性疾病，一份准确可靠血液细胞检验报告可以有效地帮助医生诊断病情、监测治疗效果。在科学技术还不发展的年代，临床医务人员常常手工分析血液细胞，此法不仅浪费时间、精力，更不能保证分析结果的准确性[1]。在医疗技术得到长足发展的今天，血细胞分析仪已经在各大小医院广泛普及，为人们快速得到准确的结果提供了可能性，但其在使用过程中仍存在不少问题，由此，笔者体会，血细胞分析仪的检测只是细胞检验的一部分，还有其他很多因素对检测结果起着非同小可的作用，现报告如下。
1 分析前的质量控制
1.1 检验人员专业素质的提高
血液细胞的检验技术要求高，它具有多学科联合的特征，这就要求检验人员必须具有全面的临床医学知识和血液学以及其他边缘学科的知识[2]。为此，血液细胞检查科室的从业人员在上岗前必须经过严格专业的培训，并进行考查，合格后方可上岗从业。
1.2 血液细胞检验单应有足够的信息
每位患者的检查单必须标明有唯一的标志，如姓名、性别、年龄、科室、住院号、采集标本的时间、病史、相关治疗措施等[3]。由于患者某些特征的差异会影响到评估标准的选取，如儿童、成人需选取不同的白细胞参考值范围。
1.3 采集标本的质量控制
1.3.1 采血时间
人体内的生物活动处于不断变化的状态，同样地，血液中的相关指标也不停地发生着周期性的变化[4]，因此，采血时间最好统一，以防波动给检测结果带来偏差。
1.3.2 配制比例适当的抗凝剂
edta-k2是目前临床上最常用的抗凝剂[5]，其比例配制相当重要，笔者对比例不准的抗凝剂的检测结果与比例正常的检测结果做以比较，得知血中的hgb、wbc、rbc、plt的含量均有改变，二者差异具有统计学意义(p<0.05)，详细结果记录如下：
注：p < 0.05为具有统计学意义。
1.4 放置的时间和温度
试验结果表明，标本采集后放置的时间越长，细胞形态改变的可能性就越大，使各指标检测不准，尤其对rdw的影响最大，久置后检测结果与正常放置时的检测不同，差异具有统计学意义(p<0.05);低温(4~8℃)也对各参数造成一定的影响，结果与室温(18~25℃)下相比，差异具有统计学意义(p<0.05)。详细记录如下：
注：p < 0.05为具有统计学意义。
注:t是低温放置2小时和30分钟比较的结果，p < 0.05为具有统计学意义。
1.5 试剂和仪器的监测、校准
对于不同的仪器，需要选择与之配套的试剂来检测[6]。仪器出厂时，厂家都会提供特定的校准液，检验人员要定期使用此校准液对仪器进行校准，而后用质控液进行测定，若测定值在允许范围之外，则需再校准，新校准系统的计算方法为：新校准系数=校准液给定值/实际校准液测定值×旧参数[7]。
2 分析过程中的质量控制
用校准好的仪器进行测量时，要核对所用试剂是否匹配，仪器的运转有无差错。此外，检测仪器所处环境的温度也相当重要，一般最适温度为18℃~22℃[8]。最好对同一血样用两个仪器检测，作对比检测，有需要时可用手工检测方法与仪器检测作以比对。
3 分析后的质量控制
对于得到的数据不要冒然下结论，最好绘制细胞直方图，根据图示再决定是否再做显微镜的检查。所有检测数据均应与临床结合进行分析，不同的病情其血细胞不同的表现，例如巨幼细胞性贫血常常表现为血红蛋白减少，rdw增大[9]。
综上所述，影响临床医学血液细胞检验质量的因素众多，要得到准确可靠的检测结果，就要牢牢把握细胞检验过程中的每一个环节，控制各因素对结果的影响。
参考文献
[1] 王骏.临床血液细胞学分析前的质量控制和管理对策[j].河北医学,2008,14(2):241-243.
[2] 高佩增.加强全自动血液分析仪质量控制的几种方法[j].临床误诊误治,2006,15(3):216-217.
[3] 朱伟,许文荣.血细胞形态学检验质量控制[j].临床检验杂志,2008,26(1):1-2.
[4] 沙薇,郭伟娜,于文波,等.试析[j].中外医疗,2011,10(23):187-188.
[5] 张仲远,迟红梅.血液细胞检验中的注意事项及质量控制 [j].实用医技杂志,2008,15(24):3212-3214.
[6] 阴斌霞,王香玲,高宁,等.临床血液细胞学分析的全程质量控制[j].现代检验医学杂志,2006,21(5):78-79.
[7] 方宗信,李维华,周虹,等.血液细胞分析仪质量控制[j].蚌埠医学院学报,2006,26(6):545-546.
[8] 刘思忠,刘文海,苏忠英,等.血细胞形态学质量控制的现状与建议[j].上海医学检验杂志,2007,18(2):117-118.
[9] 刘运双,徐鹏,薛冰蓉,等.对比试验在血细胞分析室内质量控制中的应用[j].重庆医学,2009,38(2):180-181.
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细胞毒素相关蛋白与幽门螺杆菌致病的相关性研究
【关键词】 糖尿病
【摘要】 目的 通过光学显微镜检查，研究糖尿病甲襞微循环早期病理改变。方法 采用国产医用光学仪器厂生产的wx-753型显微镜，检查部位，左手环指，甲襞皮肤滴1～2滴香柏油，滑润指甲提高透明度放大倍数为80倍观察显微镜的形态、动态指标。结果 73例(男45例，女28例)年龄24～61岁之间的糖尿病患者，ⅰ期与ⅱ期差异无显著性，符合早期网膜视病理改变。结论 糖尿病在ⅲ、ⅳ期视网膜病变加重，严重影响甲襞循环，甲襞测定反映出视网膜病变进展，为临床对症治疗提供了指导意义。
【关键词】 糖尿病;视网膜病变;甲襞微循环
【abstract】 objective to study pathological change of microcirculation of nail fold in diabetic through optical microscope.methods cedaroil dripped on digitus quartus manus of left hand in order to increase transparency.we observed microcirculation of nail fold through optical microscope (wx-753) whose enlargement factor was 80.results there were 73 cases (45 males and 28 females) whose ages ranged from 24 to 61 years old.there were no significant difference between grade-1 and grade-2.conclusion retinopathy was aggravated and microcirculation of nail fold was effected badly at grade-3 and grade-4 of diabetes.microcirculation of nail fold was consistent with retinopathy and provided the direction on clinical treatment.
【key words】 diabetes;retinopathy;microcirculation of nail fold
糖尿病视网膜病(dr)是眼科主要致盲眼病之一，其发病在国内外皆有明显升高趋势[1]。早期诊断是对or进行有效防治的前提，为了探讨or的发生发展规律，笔者于1995年3月～1996年3月对73例在内科确诊后眼底检查的dr患者，甲襞微循环检查甲襞小动脉和小静脉之间微循环改变，以探讨其与视网膜病变的关系及意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
dr患者共73例，男45例，女28例，年龄24～61岁，其中2例玻璃体积血眼底窥不进，行眼科b超检查，瞳孔扩大不理想，用双星明眼液散瞳检查。
1.2 方法
采用徐州医用光学仪器厂生产的wx-753型显微镜，检查部位，左手环指，甲襞皮肤滴1～2滴香柏油，滑润指甲提高透明度放大倍率为80倍。
【关键词】 幽门螺杆菌
【摘要】 目的 研究细胞毒素相关蛋白与幽门螺杆菌(hp)致病的相关性。方法 调查114例胃镜受检者的hp感染率，应用血清elisa技术检测了hp菌株中细胞毒素相关蛋白(cag a)阳性数，并对该蛋白与慢性胃病的关系进行了初步分析。结果 54例hp阳性者中，cag a阳性25例，阳性率46.3%;胃炎、十二指肠溃疡和胃癌组织cag a阳性率分别为27.3%、71.4%和85.7%(p<0.01)。cag a阳性菌株感染者胃黏膜的炎症程度、活动度及萎缩、肠化与淋巴滤泡形成数均高于阴性者。结论 证实cag a在hp致病中的重要作用。
【关键词】 幽门螺杆菌;细胞毒素相关蛋白;致病性
幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是人类最常见的一种慢性致病菌，感染了世界上超过50%的成年人，但并非所有的阳性者都有胃部症状或病变，hp的基因多态性与其致病性的关系目前已受到了普遍的重视，毒素相关蛋白(cag a)抗原是研究较多的一种。为了更深入地了解该菌的致病机制，本研究调查了我国南方hp菌株中cag a阳性数的比例及与胃部疾病的相关性。
1 材料与方法
1.1 病人与取材
1.1.1 病人
本组114例胃镜受检者来自我院胃镜室，男73例，女41例;平均年龄46.3岁(17～67岁)。排除孕妇和受检前2周内服用抗生素和有胃出血者。
1.1.2 胃镜检查与取材
常规胃镜检查，观察胃十二指肠病变，主要包括红斑渗出、糜烂、溃疡和胃癌。从胃窦取材进行hp检测。
1.2 hp检测每例患者均进行以下试验
1.2.1 快速尿素酶试验
应用自制试剂，24h变色者判断为阳性。
1.2.2 血清elisa技术
应用自制的超声粉碎抗原elisa检测药盒，抗原包被浓度为30μg/孔，血清稀释度为1∶100，阳性限为0.791(492nm od值)。
1.2.3 细菌分离培养
胃窦取材，skirrow选择性培养基37℃微氧培养5天分离hp菌。
1.2.4 病理染色
胃窦部组织1块，常规制作病理切片，giemsa染色镜检，菌量判定标准如下：(+):hp累及少于5个胃小凹，单个胃小凹中菌量少于10个;(++)：hp累及少于5个胃小凹，单个小凹中菌量多于10个;(+++)：hp菌累及多于5个胃小凹。
1.2.5 呼气试验(ubt)
采用微剂量(1μci)14c― ubt检测试剂盒进行(深圳养和生物科技有限公司)，阳性限为200dpm。
1.2.6 hp判断
细菌培养阳性和病理染色中有以上典型形态细菌者为阳性，培养阴性而病理菌量少于(+)或形态不典型者需合并ubt、rbt、elisa任一阳性者判断为阳性。
1.3 cag a检测
应用上海晶莹生物技术有限公司生产的克隆纯化cag a包被elisa反应板，按常规elisa技术对 hp阳性患者血清进行抗体检测，阳性限为说明规定的阴性对照吸光值(450nm)+0.40。
1.4 组织学
胃活检组织病理切片常规he染色镜检，计量观察组织学病变情况：(1)炎症程度：以上皮内出现淋巴细胞或浆细胞浸润为特征，(+)为表浅少量;(+++)为十分密集并深入黏膜深部;(++)时细胞浸润程度介于(+)与(+++)之间。(2)炎症活动度：以粒细胞出现为特征，(+)散在间质，(++)伴上皮内浸润，(+++)密集或形成腺隐窝脓肿，1个(+)计为1分，进行定量分析。
1.5 统计学方法
计算cag a阳性菌株比率，并探讨该类菌株与不同胃疾病的相关关系。
2 结果
2.1 hp阳性率与cag a阳性比例
114例就诊者中hp阳性数为54例，阳性率为 47.4%，54例hp阳性者中cag a阳性25例，阳性率 46.3%。
2.2 hp感染及cag a阳性株胃镜下病变的关系
见表1。表1 不同病变的hp感染及cag a阳性情况 例(略)注：*p<0.01，△p<0.05
2.3 cag a阳性情况与胃黏膜组织学病变的关系
cag a与胃黏膜炎症积分关系的定量分析见表 2，hp阳性者与胃黏膜癌前病变关系见表3。表2 cag a与胃黏膜炎症积分(均值)的关系(略) 表3 hp阳性者cag a状态与胃黏膜癌前病变的关系 (略)
3 讨论
hp的毒素是近来备受关注的致病因子，主要包括两种，一种是分子量为90kd的空泡样变毒素，另一种是分子量约120～140kd的cag a，后者也是hp分型中的一个重要指标。cag a阳性菌的致病作用较阴性者强[1,2]。有很多学者发现cag a与消化性溃疡关系密切[2]。weel[3]等发现消化性溃疡患者胃内的hp菌 cag a阳性达93.4%，而nud患者只有64.6%。我们的结果发现本组病人cag a阳性hp菌的比例只有46.3%，较国外的60%左右的阳性率[2～5]为低，但在十二指肠溃疡和胃癌患者的阳性率明显高于单纯胃炎者，再一次证实了该蛋白与hp致病的正相关关系。
hp与胃癌的关系也是目前研究的热点之一，流行病学资料支持两者相关，但尚缺乏基础研究的证据，hp致癌的机制也不清楚。近年的研究提示cag a可能也是hp的致癌因子之一。klaamas等发现在年龄<50岁的胃癌患者中，血清识别cag a能力明显高于对照组，与本组发现相同。但由于例数不够多，本组资料未能按年龄进行分段分析。虽然hp感染致溃疡和胃癌的机制还不清楚，但该菌在胃黏膜定植引起胃黏膜炎症肯定是致溃疡和胃癌的前期步骤。本研究发现cag a阳性菌引起胃黏膜炎症程度和活动度均较阴性菌明显，且引起的萎缩、肠化和淋巴滤泡形成等较严重病变的能力也较强，从而为cag a阳性菌毒力较强提供了另一个佐证。
【参考文献】
1 胡伏莲，周殿元，贾博琦.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997，106.
2 ching ck，wong bc，kwok e，et al. prevalence of cag a-bearing helicobacter pylori strains detected by the anti-caga assay in paltents with peptic ulcer disease and in controls. am j gastroenlerol，1996，9l：949.
3 weel jfl，van de hulst rw,gerris y,et al. the interrelation between cytotoxin-associated gene a，vacuolatinn cytotoxin and helicobacter pylori-related diseas. j infect dis，1996，173：1171.
4 cover tl，cao p，murthy p,et al serum neutralizing antibody response to the vacuolating cytotoxin of helicobacter pylori.j clin lnvest，1992，90：913.
5 peek r jr,miller g,tham k,et al.detection of helicokacter pylori gene expresion in humam gastric mucosa.j clin microbiol,1995,33:28.
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